Composición de los Medios de Cultivo
La composición de los medios de cultivo es crucial para el crecimiento y desarrollo de microorganismos. Los componentes principales incluyen:
- Carbono y Nitrógeno: Fuentes energéticas y plásticas esenciales.
- Sales Minerales: Elementos como azufre, fósforo, hierro, calcio y magnesio, que mantienen el equilibrio ácido-base y la presión osmótica.
- Factores de Crecimiento: Compuestos que el microorganismo no puede sintetizar por sí mismo.
- Factores de Arranque: Sustancias necesarias para iniciar el desarrollo microbiano, como sangre o hidratos de carbono.
- Agua: Medio en el que se desarrolla la actividad microbiana, constituyendo entre el 80% y 90% del peso celular bacteriano.
La composición básica de un microorganismo incluye agua y compuestos minerales que aportan los nutrientes necesarios. En los medios de cultivo, encontramos:
- Fuentes de Carbono: Azúcares como glucosa, lactosa y almidón.
- Fuentes de Nitrógeno: Nitratos o fuentes proteicas orgánicas como peptonas.
- Extractos de Carne: Fuente de proteínas, nitrógeno e hidratos, de composición poco definida.
- Extractos de Levadura: Preparados hidrosolubles y fuente de nitrógeno.
- Sales Minerales: Azufre, hierro, fósforo, calcio y magnesio.
- Indicadores de pH: Sustancias como el púrpura de bromocresol, que revelan el metabolismo bacteriano mediante la producción de ácido.
- Agentes Reductores: Favorecen el crecimiento en anaerobiosis.
- Agentes Selectivos: Inhiben el crecimiento de ciertos microorganismos, permitiendo el de otros.
- Colorantes: Como el verde brillante o el azul de metileno, que inhiben bacterias Gram positivas.
- Antibióticos: Actúan contra bacterias, permitiendo el crecimiento de hongos.
- Cloruro Sódico: A altas concentraciones, inhibe la mayoría de microorganismos, pero algunos como los estafilococos lo toleran.
- pH: Permite el crecimiento selectivo de microorganismos que toleran pH extremos.
- Solidificantes: Como el agar, que da consistencia al medio.
- Agua: Componente mayoritario e imprescindible.
Clasificación de los Medios de Cultivo
Según su Composición
- Medios Sintéticos: Compuestos por nutrientes químicamente bien definidos.
- Medios Complejos: Su composición química no está bien definida, utilizando extractos de carne, levadura o clara de huevo.
Según su Consistencia
- Medios Sólidos: Contienen agar en solución acuosa.
- Medios Semisólidos: Proporción de agar inferior al 1%, utilizados para estudiar la movilidad de microorganismos.
- Medios Líquidos: No contienen agar, también llamados caldos.
Según su Finalidad
- Medios Ordinarios: De uso general, permiten el crecimiento de la mayoría de microorganismos.
- Medios Enriquecidos: Contienen productos como yema de huevo o sangre, para el desarrollo de microorganismos exigentes (ej: agar sangre o agar chocolate).
- Medios Diferenciales: Revelan propiedades específicas de grupos bacterianos (ej: fermentación de lactosa).
- Medios Selectivos: Permiten el desarrollo de un grupo específico de microorganismos e inhiben otros, mediante antibióticos.
- Medios de Enriquecimiento Selectivo: Favorecen el crecimiento de bacterias en pequeña proporción (ej: caldo de selenito para Salmonella).
- Medios de Identificación: Revelan las propiedades bioquímicas de una bacteria.
Técnicas de Incubación
Tras la inoculación, es crucial mantener condiciones óptimas para el desarrollo microbiano:
- Temperatura: Una temperatura adecuada favorece el desarrollo. La temperatura óptima varía según el microorganismo (ej: 37ºC para patógenos humanos, 44ºC para coliformes fecales, 22ºC para aerobios mesófilos). Se utilizan estufas de cultivo o incubadoras.
- Agua y Humedad: Esencial para el desarrollo microbiano. Se debe revisar el espesor del medio y su fecha de caducidad.
- Disponibilidad de Oxígeno: Importante para microorganismos aerobios, anaerobios estrictos o facultativos. Se utilizan estufas convencionales, estufas de CO2 o sistemas de anaerobiosis.
- Evitar Contaminación: Mantener cerrados los recipientes durante la incubación.
- Tiempo de Incubación: Respetar el tiempo adecuado, anotando la fecha y hora de inicio.
- Control de Temperatura: Realizar controles de temperatura al menos dos veces al día.
- Control Negativo: Placa sin inocular como testigo para detectar contaminación.
- Control Positivo: Inoculación de una bacteria tipo para verificar el crecimiento.
Según la temperatura de incubación, los microorganismos se clasifican en:
- Mesófilos: Crecen a temperaturas moderadas.
- Termófilos: Crecen a temperaturas elevadas.
- Psicrófilos: Crecen a temperaturas bajas.
Definiciones Clave
- Cultivo: Población de microorganismos desarrollada en un medio de cultivo.
- Cepa: Conjunto de microorganismos de la misma especie en un cultivo.
- Sembrar: Introducir artificialmente una muestra en un medio de cultivo.
- Inóculo: Porción de la muestra en contacto con el medio de cultivo.
- Resiembra: Transferencia de una muestra de un medio a otro.
Microscopía
Clasificación de Microscopios
Los microscopios se clasifican según la fuente de energía utilizada para ampliar la imagen:
- Microscopios Ópticos: Amplifican la luz mediante lentes.
- Microscopios Electrónicos: Amplifican un haz de electrones mediante campos electromagnéticos.
Según las Lentes Utilizadas
- Microscopio Simple: Un solo grupo de lentes (también llamado estereoscópico).
- Microscopio Compuesto: Dos grupos de lentes: objetivo y ocular.
Objetivos: Tubos con lentes de pequeño diámetro y distancia focal corta para ampliar la imagen.
Ocular: Parte a la que se acercan los ojos para observar.
El microscopio compuesto de campo luminoso es el más común. El microscopio electrónico ofrece una resolución superior al óptico.
Tipos de Microscopios Electrónicos
- Microscopio de Transmisión
- Microscopio de Barrido
Tipos de Microscopios Ópticos
- De Campo Luminoso
- De Campo Oscuro
- De Contraste de Fases
- De Luz Ultravioleta
- De Fluorescencia: Combina tinción y microscopio de luz ultravioleta. La fluorescencia es la emisión de radiación por ciertas sustancias.
La diferencia entre el de luz ultravioleta y el de fluorescencia es la técnica de observación. El de fluorescencia se usa en inmunología para detectar reacciones antígeno-anticuerpo.
Propiedades Ópticas del Microscopio
- Aumento: Relación entre el tamaño de la imagen observada y el tamaño real. Depende de la amplificación del ocular y del objetivo.
- Poder de Resolución: Capacidad de una lente para distinguir dos objetos muy juntos.